酶催化反应属于无细胞体外催化过程
图：采用纯化酶(a)或细胞提取物(b)进行的无细胞代谢工程
主要包括氧化还原酶、水解酶、转移酶、裂合酶、异构酶和连接酶等六大类酶。
具体应用范围涵盖：
医药研发领域（如药物代谢酶CYP450的抑制动力学研究、靶点酶抑制剂/激活剂的筛选与效能评估）；
工业生物技术领域（如洗涤剂用蛋白酶、淀粉酶的活性与稳定性测试，生物催化过程中关键酶的动力学参数优化）；
食品安全与诊断领域（如用于检测食品成分或病原体的生物传感器中酶的动力学特性表征）；
基础科学研究（如新型酶的功能鉴定与机理探索）。
酶固定化
研纯生物围绕酶催化动力学的关键参数展开，主要包括：
1. 米氏常数与最大反应速率测定：通过测定不同底物浓度下的初始反应速率，利用Lineweaver-Burk图、Eadie-Hofstee图或非线性回归拟合等方法，精确计算米氏常数（Km）和最大反应速率（Vmax），反映酶与底物的亲和力及催化效率上限。
2. 转换数测定：计算每个酶分子在单位时间内催化底物转化为产物的最大分子数（Kcat），是衡量酶固有催化效率的核心指标。
3. 抑制动力学分析：鉴定抑制剂的类型（竞争性、非竞争性、反竞争性、混合型抑制）并测定其抑制常数（Ki），这对于药物毒理学评估和药物设计至关重要。
4. 酶稳定性与变性动力学研究：评估温度、pH等环境因素对酶活性的影响，测定酶的半衰期、最适反应条件及热变性参数。
5. 激活剂效应分析：研究金属离子、辅因子等对酶活性的激活作用及动力学影响。
检测方法
为确保数据的准确性和重现性，第三方检测机构严格遵循国际或国家标准的检测方法，并根据客户需求灵活选择最适方案。常用方法包括：
1. 分光光度法：最经典和广泛应用的方法。通过监测反应过程中底物或产物在特定波长下吸光度的变化（如NADH在340 nm的吸收变化）来实时追踪反应进程。该方法快速、灵敏且易于实现连续监测。
2. 荧光分析法：利用具有荧光的底物或产物进行检测，灵敏度通常高于分光光度法，适用于低浓度酶或底物的反应体系。
3. 色谱法：如高效液相色谱法，通过分离并定量反应混合物中的底物和产物，适用于那些反应物没有明显光学性质变化的反应，结果准确可靠。
4. 电化学法：适用于产生或消耗电流物质的反应，如氧化还原酶催化的反应。
研纯生物所有实验均设立严格的对照（如空白对照、阳性对照），并确保反应处于初速度阶段，以符合米氏方程的假设条件。
